Trong phần phim này, hai nhân vật chính là anh em nhà Templeton đều đã trưởng thành và có cuộc sống riêng. Hai người ít gặp nhau và có vẻ những mâu thuẫn bắt đầu nảy sinh khi cả hai không còn là trẻ con nữa. Dẫu vậy, mối quan hệ này sẽ được giải cứu nhờ sự xuất hiện của cô con gái Nhóc Trùm thế hệ mới - Tina. Trong lúc đó, một tiến sĩ khoa học có tâm hồn đen tối đang âm mưu thực hiện một kế hoạch tạo ra đội quân Nhóc Trùm xấu xa và Tina cần nhờ đến sự trợ giúp của bố và cậu của mình cùng một loại thuốc có khả năng biến người lớn thành trẻ em, hiệu lực trong vòng 48h.